kerafast EH1025-PM說明書
Pseudotyped ΔG-luciferase (G*ΔG-luciferase) rVSV
假型ΔG-熒光素酶（G*ΔG-熒光素酶）rVSV
ΔG-熒光素酶是一種復(fù)制受限的重組水皰性口炎病毒 (rVSV)，可用于生產(chǎn)含有來自多種異源病毒（包括需要 BSL-3 或 BSL-4 生物防護(hù)的病毒）包膜糖蛋白的假型病毒；然而，由于 rVSV-ΔG 假型的傳染性僅限于單輪復(fù)制，因此可以使用 BSL-2 遏制措施來處理假型。這些特性與 rVSV-ΔG 假型的快速復(fù)制動(dòng)力學(xué)一起，已被證明在旨在鑒定多種病毒的細(xì)胞受體的研究中很有用，并且它們還提供了一個(gè)強(qiáng)大的平臺(tái)來篩選進(jìn)入抑制劑的文庫并評估隨后的中和抗體反應(yīng)。疫苗接種[1]。
訂購該試劑時(shí)，將發(fā)送一瓶 VSV-G 假型 ΔG-熒光素酶 (G*ΔG-熒光素酶)，按照 [1] 中所述的程序，可直接使用該酶生成含有您選擇的包膜蛋白的假型。用 G*ΔG-熒光素酶感染細(xì)胞會(huì)在感染后 2-3 小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生可檢測的熒光素酶活性，并在感染后的接下來 4-8 小時(shí)內(nèi)迅速增加。對于每個(gè)使用的細(xì)胞系，感染性需要針對熒光素酶活性進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。絕對傳染性可以通過間接免疫熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)使用 VSV 基質(zhì) (M) 蛋白、VSV 核衣殼 (N) 蛋白或熒光素酶的抗體進(jìn)行量化。由于 G*ΔG-熒光素酶經(jīng)歷單輪感染，每個(gè) M、N 或熒光素酶陽性細(xì)胞代表一個(gè)病毒感染單位。
研究員有責(zé)任尋求機(jī)構(gòu)生物安全安全委員會(huì)批準(zhǔn)在其實(shí)驗(yàn)室空間內(nèi)使用重組 DNA、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或傳染性病原體，并在使用這些材料期間保持機(jī)構(gòu)生物安全安全委員會(huì)的批準(zhǔn)。
來自Michael A. Whitt 博士的實(shí)驗(yàn)室。，田納西大學(xué)。
| 產(chǎn)品類別： | 病毒 |
| 生物安全等級： | BSL-2 |
| 載體信息： | G*ΔG-熒光素酶使用 [1] 中所述的 VSV 反向遺傳學(xué)系統(tǒng)從質(zhì)粒 pVSV-δG-熒光素酶、pBS-N-ΦT、pBS-P-ΦT、pBS-G-ΦT 和 pBS-L-回收ΦT。恢復(fù)后，在用 pCAGGS-G 轉(zhuǎn)染的 BHK-21 細(xì)胞上擴(kuò)增斑塊分離物（斑塊可以在瞬時(shí)表達(dá) VSV-G 的細(xì)胞上獲得）。通過感染用 pCAGGS-G 以低復(fù)數(shù) (MOI = 0.1) 轉(zhuǎn)染的 BHK-21 細(xì)胞并在 BHK-21 細(xì)胞上滴定，產(chǎn)生二級工作原液。 |
| 病毒： | VSV-G 假型 ΔG-熒光素酶 (G*ΔG-熒光素酶) |
| 滴度： | ≥ 6x10e8 IU/mL |
| 血清型： | 印第安納州/圣胡安 |
| 接種條件： | 為了產(chǎn)生具有異源包膜糖蛋白的假型，細(xì)胞（BHK-21 或 HEK-293）首先用表達(dá)所選糖蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，約 24 小時(shí)后用 G*ΔG-熒光素酶以約 3 的復(fù)數(shù)（MOI）感染到 5. 為了產(chǎn)生 G*ΔG-熒光素酶的工作儲(chǔ)備，已用 pCAGGS-G 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用低多重性 (MOI = 0.1) 的 G*ΔG-熒光素酶感染，并在大約 18-24 小時(shí)后收獲培養(yǎng)物上清液。感染。 |
| 貯存： | 儲(chǔ)存在-80℃。不推薦多次冷凍/解凍。 |
| 發(fā)貨： | 在干冰上冷凍 |
